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大鼠碳酸酐酶檢測試劑盒的主要操作方法

點擊次數:21發布時間:2022-06-06
 
  大鼠碳酸酐酶檢測試劑盒適用物種大鼠,人,小鼠,豬,狗,牛等正常動植物樣本血清/血漿/尿液/組織應用,僅供體外科研實驗研究使用,嚴禁用于臨床診斷。
 
  大鼠碳酸酐酶檢測試劑盒的操作方法:
 
  [雙抗體夾心法]
 
  1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
 
  2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
 
  3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
 
  4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
 
  5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
  6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
 
  [間接法]
 
  1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
 
  2.次日洗滌3次;
 
  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
 
  4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
 
  5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
 
  6.’*后一遍用DDW洗滌。
 
  其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
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